Kit de microscopio de epifluorescencia para la red alimentaria del suelo

Hay dos usos distintos para la microscopía de epifluorescencia:

Primero, la colonización de las raíces por hongos micorrícicos es fácil de ver (Ames, R. y E. Ingham, 1984), ya que los hongos VAM producen compuestos autofluorescentes en la interfaz de la pared celular arbuscular y la membrana celular de la planta. Con imágenes de cámaras cuadriculadas, es fácil ver el porcentaje de la longitud total de la raíz ocupada por arbusculos activos; la colonización se puede evaluar fácilmente. Cuente el número de cuadrículas en la raíz que tienen arbusculos fluorescentes presentes en la cuadrícula y cuente el total de cuadrículas examinadas. Las cuadrículas con arbusculos fluorescentes divididas por el total de cuadrículas con y sin arbusculos fluorescentes, multiplicado por 100, da el porcentaje de colonización. El trabajo de John Moore y una segunda persona en 1999 (espero que la referencia de este artículo esté en nuestra lista de referencias del sitio web) mostró que en las gramíneas, el 12% de colonización produce un beneficio medible para la planta, pero el 40% de colonización permite que se obtengan TODOS los beneficios.

El segundo uso de la microscopía de epifluorescencia implica el uso de diacetato de fluoresceína (FDA, artículo original de Bengt Soderstrom, alrededor de 1976, y debería estar en el material de referencia del sitio web).

Una aplicación es evaluar la cobertura de las superficies de las hojas, frutas o corteza por capas de organismos que crecen en esas superficies. Solo los organismos activos absorberán el tinte y fluorescerán. Se pueden cortar tiras de las superficies, teñirlas colocando los materiales en diacetato de fluoresceína durante 3 minutos, y el tinte será absorbido y metabolizado por células activas en crecimiento. La colocación de la hoja, corteza o fruta en un portaobjetos iluminado por las longitudes de onda de la fluoresceína permite evaluar el porcentaje de la superficie total de la planta donde los organismos activos cubren la superficie. Una cobertura de alrededor del 70% o más de bacterias y hongos activos resultará en la reducción de enfermedades fúngicas y bacterianas en las hojas, madera y frutas. La cobertura es el factor importante para que los organismos patógenos nunca lleguen a la superficie de la planta; los alimentos para permitir la germinación de las esporas o partículas reproductivas de los organismos patógenos serán consumidos primero por los organismos beneficiosos.

Una segunda aplicación de la tinción con FDA es añadir el FDA a una dilución de suelo, compost, extracto o té durante un período de 3 minutos, luego añadir agar caliente y fundido, lo que detendrá a todas las células de absorber más FDA (las células deberían ser eliminadas o al menos ralentizadas significativamente). Coloque la muestra en un pozo de portaobjetos, NO en un portaobjetos de hemocitómetro (sin embargo, consulte Ingham et al 1985 para descripción y detalles), coloque el portaobjetos en el microscopio y evalúe el número de bacterias activas (teñidas de color fluoresceína amarillo-verde), la longitud de las hifas fúngicas teñidas de color fluoresceína, y luego evalúe el total de bacterias y el total de hongos utilizando microscopía de sombra.

Tinción vital de hongos en cultivos puros y en suelo con diacetato de fluoresceína. / Söderström, Bengt.

Incluye:

• Microscopio trinocular i4 con objetivos de plan infinito
• Módulo de epifluorescencia Lumin
• Cámara de microscopio BioVID HD 4K